A clonazzioni di u genu hè l'attu di riunione, o cloni, di un genu singulari. Quandu u geniu hè identificatu, i cloni pò esse usatu in parechji spazii di a ricerca biomedica è industriale. L'ingenieria genetica hè u prucessu di i genesi di clonazzioni in novi organisimi o alterendu a secùnea di DNA per cambià u produttu di prutezione. L'ingenierìa genetica deprezza di a nostra abilità di realizà e seguenti procedimi essenziali.
01 Reacciu Chain Polymerase
02 Enzimi di Restriction
U scuperta di i enzimi cunnisciuti cun endonucerose di restrizzione hè statu essinziali per l'ingignirìa di prutezione . L'enzimi cut DNA in locu particulari basati supra a secùta nucleosede. E centu di arentificazioni di restrizzioni diffirenti, capaci di cutà DNA à un locu distinto, sò stati insulati di parechje sfarenti varii di bacteria. U DNA cut cun un enzima di restrizzioni produce assai fragmenti cchiu piccu, di varianti tene. Sti pò esse separati da l'elettroforesi gelati o di cromatografia.
03 Electrophoresis
U DNA purificante da una cultura cellulosa, o u cutà cù l'enzimi di restrizzione ùn esse di assai usi s'ellu ùn pudemu micca visualizà l'ADN - cusì hè truvà un modu per vede o micca u vostru extract cuntene nunda, anu cutatu. Una manera di fà questu hè di l'elettroforesi gelati. Gelli sò usati per una varietà scopi, da u cut DNA per detectar inserti di DNA è punti nucelli.
04 Cumplettu dui Pieces of DNA
In a ricerca genetica, hè spessu necessariu ligate dui o più catene individuali di DNA, per creà una struttura recombinante, o cercate un filu circular chì hè statu cutatu cù enzimi di restrizzioni. L'enzymes chiamati DNA ligase can create links covalenti trà i catene nucleotidi. L'enzimi I DNA polimerase I e polinucleotide kinase sò ancu impurtanti in questu prucessu, per omplimenti di spazii o fosforificate i 5 'findi, rispettivamente.
05 Selezione di DNA di autore replicatore
I picculi sparghje Circular of DNA chì ùn sò micca parte di un genomu bacteriale, ma sò capaci di autore replicazione, sò cunnisciuti com plasmidi. Li plasmiddi sò spessu usati com vectors per transducer genes trà i microorganisimi. In biotechnologia, quandu u genu di interessu hè stata amplifikata è u genu è u plasmidu sò chjusi per l'enzimi di restrizzione, sò ligati in ghjinira generale ciò chì hè cunnisciutu com'è DNA recombinante. L'ADN di viral (bacteriophage) pò ancu esse usatu com'è un vettore, cumu pò cosmidi, plasmids recombinanti chì cuntenenu genes di bacteriophage.
06 Metu per Move un Vector in una Cell Cellule
U prucessu di trasmissione materiale geneticu nantu à un vettore cum'è un plasmid, in novi cilìculi di l'ostili, hè chjamatu trasfurmazioni. A so tecnulugia precisa chì e cilestri ospitanti sò esposti à una cambiamentu ecunomicu chì li fa "competente" o permettenu temporale pè u vettu. L'Electroporation hè una tali tecnica. U più grande u plasmidu, più bassa l'efficienza cù a quale hè stata presa da i celi. I segmenti di u DNA più più faciule di cloneghja utilizendu u bacteruòfagiu, retrovirus o altri vectors virali o cosmidi in un metudu chjamatu transduzione. Fage o vectors virali sò spessu usati in a medicina regenerativa, ma puderanu pruvucà inserimentu di l'ADN in parte di i nostri cromusomi induve ùn a vulia micca, causannu cumplicazioni è ancu u cancer.
07 Mette pè selezziunà l'organismi transgene
No tutti e ciloghji averemu l'ADN durante a transformazione. Hè bisognu chì ci hè un metudu per deteczione di quelli chì fà. In generale, i plasmidi purtemu genesi per a resistenza di antibiotici è i cungresi transgeneghjani pò esse sceltu nantu à l'espressione di quelli gene è a so capacità di cultivà nantu à l'articuli chì cuntenenu l'antibijuticu. I mètge alternativu di scelta dipendenu di a presenza di l'altri pruteggii repertorii, cum'è u sistema x-gal / lacZ , o a prutezza di fluoriscenza virdi, chì permettenu a selection basada in u fiori è fluoriscenza, rispettivamente.