Sviluppatu in u 1983, u prucessu di a PCR hà permessu di realizà a sequencing di DNA è identificanu l'ordine di i nucleotidi in genesi individuali.
U metudu aduprà a ciclicia termale o u calore di scaldà è a ripertazione di a reazione per u funziunamentu di l'ADN è a replicazione. Mentre a PCR cuntinua, l'"DNA" novu hè utilitate com'è mudellu per a replicazione è una reazione di a cattura sviluppa, espunzificatu à amplifying the DNA template.
I tecnulugii di PCR sò aplicati in parechji spazii di a biotecnologica, inclui l'inginerie di prutezione , i cloning, forensics (DNA fingerprinting), teste di paternità, u diagnosticu di e eredità è / o infizziosi, è per l'analizamentu di e espereculi ambientali.
In forensic, in particulare, PCR hè particularmente utile perchè amplifichi ancu a più petite quantità di evidenza di DNA. A PCR pò ancu esse usatu per analisi di DNA chì hè migghiara d'anni, è sti tecniche sò stati utilizati per identificà da tuttu di un mamut 800.000 anni di età à e mummia di u mondu.
A Prudizzioni di PCR hè dinò:
- Initializazione: Stu passu hè necessariu solu per l'ADN polimerase chì dumandanu esse cuminciari PCR. A riazione hè chjucata à entre i 94 è 96 ° C è hà tenuta per 1-9 minuti.
- Denaturazione: Sì u prucessu ùn deve micca eseguizzione, a denaturazione hè u primu passu. A riazione hè chjucatu à 94-98 ° C durante 20-30 seconde. U duminiu di l'idrogenu di u mudellu di l'ADN sò interromputi è sò moltu molte suleni di l'ADN.
- Annealing: A temperatura di a reazzione hè più bassa per entre 50 è 65 ° C è mantene da 20-40 seconde. I primi anneal à u mudellu di DNA di battuto. A temperatura hè assai impurtante durante stu passu. Sì troppu bagnu, u primu cesu ùn sia micca attache. Sì troppu friddi, u primu cresce bind imperfetamente. Un bon bonde si forma quandu a seqüència principale cumpleta cù a seqüència di mudelli.
- Extension / Elongation: A tampiratura duranti stu passu varia cù u tipu di polimerase. A DNA polimerase sintetiza un corpu di DNA novu.
- Elongazione finale: Stu passu hè fattu à 70-74 ° C durante 5-15 minuti da u ciclu finali di PCR.
- Partitu finale: Stu passu hè fakultattivu. A temperatura hè tenuta à 4-15 ° C è strops a reazzioni.
A prucedimentu hè divisu in trè isulane:
- L'amplificazione exponenciale: Durante ogni ciclu, u pruduttu (u pezzu specchiu di DNA chì si riplicava) hè ridotta.
- Stage d'impurtanza: Quandu a DNA polimerase perde attività è cunsuma risultati, a retazioni prurite.
- Plateau: No s'acumule un produttu più.