Stu buffer hè utilizzatu per a siputtu di l'electroforesi di DNA
U buffu TBE hè particularmente utile per a siparazioni di fragments di DNA diminutiu (MW <1000), cum'è i prudutti petrolifichi di l' esità di l'enzima di restrizzioni .
TBE pussedi una capacità bufferà più grande è dà una risulente più nimu da u buffulu TAE . U buffulu TAE hè una suluzione fatta di Tris base, acid àceticu è EDTA (Tris-acetate-EDTA).
U TBE hè generale più caru di u TAE è impida a DNA ligase, chì pò causà prublemi si i pezzi sussidiari di a purificazione di l'ADN è di ligatura sò pensati. Cù i trè passi simples chì seguitanu, amparate cumu per fà u buffu TBE. Ùn deve micca fà più di circa 30 minuti per creà stu buffer. Eccu cumu:
Preparate una Successione Stituzione di EDTA
Un solu EDTA (ethylenediamine tetraacetic acid) deve esse dispostu annantu à u tempu. EDTA ùn sia micca solu in solu solu finu à chì u pH hè agitu à circa 8,0. Per una solu suluzione di 500 millilitru di 0,5 EDTA EDTA, pesa 93,05 grammi di sal di discondu EDTA (FW = 372,2). Dopu dissolve in 400 millilitri acqua desionizata è aghjusta u pH cù NaOH. Dopu quì, cumprà a suluzione per un voluminu finali di 500 millilitru.
Preparate una soluzione solu di TBE
Fate una suluzione di saldatura (5x) cuncentrata (5x) cù 54 g di Tris base (FW = 121.14) è 27.5 g l'acidu boricu (FW = 61.83) è dissolvi in apprufittante 900 millilitru di acqua desionizata. Allora aghjunghje 20 millilitru di 0,5 M EDTA (pH 8,0) è agisce a suluzione per un voluminu finali di 1 litru.
Questa suluzione pò esse guardatu à a temperatura di l'ambienti, ma un precipitate se cumpranu solu solu. Ammaistrà u buffer in bottiglia di vetro è scaccià se un precipitate sò furmatu.
Preparate una soluzione uttale di TBE
Per l'electroforesi gel à l'agarose, un buffu TBE pò esse usatu à una cuncentrazione di 0.5x (1:10 dilution of the concentrated stock). Dilute a suluzione di stock 10x in acqua diionizzata. A concentrazioni di solute finali sò 45 mM Tris-borate è 1 mM EDTA. U bufferu hè prestu à utilizà à a correru un gelettu agarose .
Chì ci hè bisognu
Per fà u buffu TBE, avete bisognu di quattru sustanzi. I punti restante nantu à sta lista sò equipi. Quessi sustanzi chì sò dumandati esse u sal disodiu EDTA, a basa Tris, l'acidu boricu è l'acqua deionizzata.
À l'equipamentu, avete bisognu di un metru di pH è di normi per calibrati, comu appruvati. In più di questu, avete bisognu di 600 anni di millilitru è 1500 befaccii o fiaschi. Dopu l'arronamentu di e vostre equipamentu hè bisognu di cilindri è rinfriscà e stir.
Verificate l'inventariu in u labu perchè esse utilizatu per verificate chì avete tuttu ciò chì avete bisognu di prima. Nunda pò esse azzione di avè firmatu in a fine di preparazione di una solu suluzione perchè tù ùn esciveru di e materiae propria.
Se u vostru labellu hè in l'urdina o u vostru situ di u travagliu, verificate cù u persunale per vede chì sò tutti l'articuli in u sughjettu. Fate cusì vi pò salvà u tempu è energia in fine.